一個月內，頂級學術期刊連發兩篇頂級論文！上半年引爆生物圈的華人科學家張鋒教授團隊又有新動作！這次，他在一月內，分別在《Nature》、《Science》連發兩篇論文！他將CRISPR-Cas13a改造成了靈敏度達到了阿摩爾級（aM，10的負18次方摩爾每升），可以檢測單分子的SHERLOCK技術。而這其中，RPA起到了不小的作用。
那么，什么是RPA呢？
RPA,即重組酶聚合酶擴增技術，是在由多種酶和蛋白的參與下，在恒溫條件下實現核酸指數擴增的技術，被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。
RPA技術主要依賴于三種酶：能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應溫度在37°C左右。
RPA的反應原理
RPA的反應過程，首先是重組酶與引物結合，形成蛋白-DNA復合物。接著在dsDNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。而被替換的DNA鏈與SSB（單鏈DNA結合蛋白）結合，防止進一步被替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非常快，一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。
RPA與相關技術的比較
與PCR實驗相比，RPA實驗能在恒定溫度下進行全程實驗，沒有復雜的操作，對儀器及人員的要求不高，適合基層或現場快速診斷。
而另一種新興技術，LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名為“環介導等溫擴增反應”，由于其簡便的操作，也被視為PCR技術強有力的競爭者。在此，讓我們對比下LAMP與RPA兩種試劑盒進行的實驗：
RPA試劑盒 | ||
主要組分 | 鏈置換DNA聚合酶 | 重組酶；單鏈結合蛋白；鏈置換DNA聚合酶 |
最適反應溫度 | 60-65℃ | 37-40℃ |
推薦反應時間 | 40min左右 | 20min左右 |
引物數 | 2對 | 1對 |
保存形式 | 液體 | 凍干粉；液體 |
檢測方式 | 熒光目視；比濁法實時濁度儀 | 電泳；試紙條；熒光定量 |
擴增產物可否用于下游應用 | 否 | 是 |
可否Multiplex/多重反應 | 否 | 是 |
缺點 | 氣溶膠，易產生假陽性 | 價格高 |
上月，RPA 技術的開發公司——英國TwistDx Inc的商務總監Tony Hill來到了我公司，為我們深入介紹了RPA技術，及TwistDx的各類產品。
Tony還與我公司的技術人員一同拜訪上海市農業科學院及上海閱爾基因技術有限公司，分別向趙凱研究員及其研究生，以及閱爾基因的研究人員介紹了RPA 技術，解答他們在使用中遇到的問題。
英國TwistDx公司（前身為ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術公司。該公司通過突破等溫DNA擴增，開發的重組酶聚合酶擴增專利技術（RPA），被譽為DNA診斷領域的革命性創新。
TwistDx以此技術為基礎生產的核酸擴增類產品，能在恒定且較低的溫度下，僅用10~20分鐘，進行單分子核酸檢測。這一技術對環境、硬件設施的要求很低，對于生物防護、水體檢驗、食品檢驗、醫療診斷、微流體、獸醫等方面都有良好的應用。
RPA擴增的各種體系試劑盒中，含有DNA、RNA擴增所需的所有試劑，研究者只要準備好引物和模板就行了。擴增結果可以分別通過凝膠電泳檢測、熒光定量檢測或試紙條檢測，產物純化后可用于下游研究。
默瑞（上海）生物科技有限公司與英國TwistDx公司達成戰略合作，負責RPA技術及相關產品在中國大陸地區的推廣。
默瑞（上海）生物科技有限公司（Morey Biosciences ,Inc .簡稱默瑞生物）成立于2016年7月22日，于8月1日正式運營，其前身是一家具有15年代理銷售生命科學儀器的專業公司。提供一流的服務，代理一流的產品，成就一流的公司。默瑞生物以此為經營理念。默瑞擁有兩個產品部，儀器部和試劑部。
儀器部主要代理產品有：Leica顯微系統，Merck Millipore實驗室純水超純水儀及配套耗材，Roche實時定量PCR儀、核酸純化，Beckman流式細胞儀、離心機，IKA桌面小儀器，Lonza 細胞核轉染系統，Miele清洗機，Tecan酶標儀、液體工作站等。
試劑部主要代理產品有： TwistDx恒溫擴增試劑盒，Echelon酯類研究試劑，Jackson ImmunoResearch抗體，MTI-GlobalStem細胞轉染試劑，ChromoTek標簽抗體， Horizon Discovery測序標準品和細胞，Enzymatics二代測序酶， Biomatik公司Elisa試劑盒，BiosPacific抗體抗原，bioWORLD植物生長劑，Nanocs PEG修飾劑，Spectrumlabs透析袋，Brighter Ideas熒光蛋白，Lumiprobe熒光染料，Polysciences微球，Emfret心血管疾病研究抗體， Iduron糖胺聚糖產品，JenaBioscience分子試劑，eENZYME病毒研究工具等。
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TwistDx公司RPA恒溫擴增技術被譽為DNA診斷領域的革命性創新
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