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超敏 CRISPR-DNA 等溫快速擴增檢測凍干球(試紙條型)

超敏 CRISPR-DNA 等溫快速擴增檢測凍干球(試紙條型).png 產(chǎn)品名稱 超敏 CRISPR-DNA 等溫快速擴增凍干球(試紙條型) 2.原理概述 本試劑盒利用高敏恒溫擴增(H-SIA)以及 CRISPR/Cas(基因編輯核酸檢測技術(shù))對 樣本中 DNA 進行檢測。檢測結(jié)果以試紙條形式呈現(xiàn)。 首先對核酸樣本進行高敏恒溫擴增(H-SIA),然后向擴增產(chǎn)物中加入 CRISPR 反應(yīng)體

  • 產(chǎn)品介紹
  • 規(guī)格參數(shù)
  • 售后服務(wù)

超敏 CRISPR-DNA 等溫快速擴增檢測凍干球(試紙條型).png

產(chǎn)品名稱 超敏 CRISPR-DNA 等溫快速擴增凍干球(試紙條型) 

2.原理概述 本試劑盒利用高敏恒溫擴增(H-SIA)以及 CRISPR/Cas(基因編輯核酸檢測技術(shù))對 樣本中 DNA 進行檢測。檢測結(jié)果以試紙條形式呈現(xiàn)。 

首先對核酸樣本進行高敏恒溫擴增(H-SIA),然后向擴增產(chǎn)物中加入 CRISPR 反應(yīng)體 系并進行恒溫檢測。若反應(yīng)體系中的 crRNA(序列中含有與 Cas 蛋白結(jié)合的回文序列和與目 的基因序列互補的特異序列)識別到擴增產(chǎn)物中的目的基因序列,則激活 Cas 蛋白的切割活 性,剪切反應(yīng)體系中的報告 RNA,報告 RNA 被剪切后會發(fā)出熒光被儀器檢測出熒光信號; 若擴增產(chǎn)物不含目的基因序列,則不激活 Cas 蛋白,報告 RNA 不被剪切。 

CRISPR 免疫層析試紙顯色原理(消線法):試紙結(jié)合墊中含有鼠源抗 FITC 抗體標記的 乳膠微球,可與報告 RNA 上的 FAM 標記結(jié)合,形成完整的“生物素-報告 RNA-FAM-FITC- 乳膠微球”

復(fù)合物:試紙 T 線處包被有鏈霉親和素,可與生物素結(jié)合,質(zhì)控線 C 線處包被 有羊抗鼠二抗,可與抗 FITC 抗體結(jié)合。若無目的基因序列,則報告 RNA 未被 Cas 蛋白剪 切,反應(yīng)體系在經(jīng)過 T 線時,完整的“生物素-報告 RNA-FAM-FITC-乳膠微球”復(fù)合物 與鏈霉親和素結(jié)合,則 T 線顯色;若有目的基因序列,則報告 RNA Cas 蛋白剪切,反應(yīng) 體系在經(jīng)過 T 線時,切割后形成的“FAM-FITC 抗體-乳膠微球”復(fù)合物無法與鏈霉親和 素結(jié)合,則 T 線不顯色。無論報告 RNA 是否被剪切質(zhì)控線 C 線均能夠與復(fù)合物中過量的“抗 FITC 抗體-乳膠微球”結(jié)合而顯色。 

3.主要組成成分 產(chǎn)品組成 主要成分 規(guī)格 CRISPR-DNA 檢測凍干球 基礎(chǔ)型 H-SIA 凍干球 擴增試劑凍干球 48T/基礎(chǔ)型 CRISPR 凍干球 檢測試劑凍干球 模板稀釋液 Mg 2+溶液 48T/試紙條 乳膠微球、NC 膜等 48T/

4.產(chǎn)品特點 

4.1 外觀:試劑盒包裝完整,模板稀釋液無漏液。 

4.2 檢測下限:檢測自建體系性能達到 100 copy/mL。不同體系檢測性能會略有差異。 

4.3 重復(fù)性:試劑檢測同一樣本 10 次,結(jié)果均一致。 

5.有效期 2-8℃避光下有效期為 12 個月。28±2℃避光保存下有效期為 3 個月。 

6. 檢測方法 

6.1 準備模板:采用模板稀釋液按照試驗要求稀釋模板。 

6.2 H-SIA 等溫擴增:取 1.5 ml 離心管放入 1 H-SIA 球,加入引物探針,加入 45.5 μl 板(終體積為 50ul),輕彈幾次混勻。后 42℃孵育 20 min注:F/R 引物推薦用量:10 μM,各加入 1-2μl探針推薦用量:500-1000 ng/T。可根據(jù)要求進行調(diào)整。 

6.3 CRISPR 剪切反應(yīng):將 1 CRISPR 凍干球放入 8 反應(yīng)管中,加入 45 ul 水溶解,加入 crRNA,加入 5uL 等溫擴增產(chǎn)物,上下顛倒混勻后離心。后將 8 聯(lián)排放于熒光定量 PCR 中, 37℃孵育 20 min 進行 CRISPR 反應(yīng)。 注:crRNA 推薦用量:100-500 ng/T。可根據(jù)體系進行調(diào)整。 檢測通道可根據(jù)引物探針不同進行更改。 

6.4 試紙條顯色:取 80 μl 6.3 反應(yīng)溶液放入反應(yīng)管中(酶標板、1.5 ml 離心管等),將試紙 條紅色端放入液體中,2 min 后判讀結(jié)果。 

7. 檢的結(jié)果判讀 本試劑盒結(jié)果判讀采用“消線法”方式,即 C T 線同時顯色為陰性結(jié)果,僅 C 線顯色為陽性結(jié)果,C 線不顯色結(jié)果無效。(注:T 線為靠下端插入液體處。) 陽性結(jié)果表示:樣本中可能存在檢測的病毒核酸,應(yīng)結(jié)合臨床癥狀判斷感染狀態(tài)。

8.注意事項 

8.1 本試劑用于體外檢測,僅供科研使用,使用前請仔細閱讀本說明書。 

8.2 本試劑盤應(yīng)嚴格按照說明書要求儲存,必需在有效期內(nèi)使用。 

8.3 應(yīng)按說明書嚴格進行操作,請勿混合使用不同批次組分。 

8.4 操作失誤或樣本量過少都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。 

8.5 如果試劑盒包裝損壞、有破損、漏氣等,請不要使用該產(chǎn)品。 

8.6 試劑袋中的樣本處理液、干燥劑不得吞服。 

8.7 模板稀釋液中含有少量防腐劑,可能對皮膚和眼睛造成刺激。如果該溶液接觸到皮膚或 眼睛,立即用大量清水沖洗。 如發(fā)生皮膚刺激或皮疹,應(yīng)及時就診。 

8.8 操作時應(yīng)注意做好安全防護措施,使用前后清洗或消毒雙手

版權(quán)所有:默瑞(上海)生物科技有限公司   

技術(shù)支持:易動力網(wǎng)絡(luò)

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