2006年Piepenburg等研發的重組酶聚合酶擴增技術（recombinase polymerase amplification，RPA），該技術可以在37~42 ℃條件下實現待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優點，特別適用于基層和現場即時檢測。

      RPA反應由3種關鍵酶（重組酶Uvs X、單鏈結合蛋白Gp32以及鏈置換DNA聚合酶）、能量供應體系（三磷酸腺苷、磷酸肌酸以及肌酸激酶）、穩定反應體系（Tris、醋酸鉀、高分子量聚乙二醇以及二硫蘇糖醇等）、三磷酸脫氧核糖核苷酸（deoxyribonucleotide triphosphate，dNTP）、醋酸鎂等成分組成。

   RPA反應基本原理如下圖，主要包含5個階段：

（1）在三磷酸腺苷供能的條件下，重組酶輔因子（Uvs Y）協助Uvs X與反應體系中的引物結合，形成酶-引物復合體，該復合體在反應體系中尋找雙鏈DNA同源序列［3］；

（2）在同源序列處發生鏈交換反應形成D環結構，同時Gp32與被置換的DNA單鏈結合進一步穩定D環結構；

（3）Uvs X從酶-引物復合體中解離，DNA聚合酶識別引物游離的3′-OH端，添加dNTPs啟動擴增反應；

（4）模板母鏈分離，DNA子鏈合成；

（5）兩DNA子鏈合成完畢。該過程不斷循環實現檢測靶標的指數擴增直到反應體系中能量消耗殆盡。

      目前，仍沒有一款專用的軟件可供用戶設計RPA反應所需的引物和探針。RPA引物、探針設計對RPA反應有重要影響，RPA引物長為30~35個堿基，不同引物、探針組合有不同的擴增效率，為達到實驗預期，進行多次篩選是必要的。探針堿基錯配將影響擴增效率，出現假陽性結果并總結了熒光檢測法探針的要點（熒光基團與淬滅基團之間1~2個堿基，盡可能降低G含量等）。

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