TwistDx 的重組酶聚合酶擴增 (RPA)
將徹底改變在資源有限的現場環(huán)境中擴增和檢測核酸的能力。
TwistDx Inc. 由分子生物學家兼蛋白生物化學家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同創(chuàng)立，其總部位于美國馬薩諸塞州劍橋市。TwistDx Limited 于 2002 年成立，其公司位于英國劍橋，2010年被IVD行業(yè)POCT巨頭美艾利爾Alere收購，Alere在2017年4月被雅培Abbott收購。
RPA 體系的重點是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復合體，并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對。單鏈 DNA 結合 (SSB) 蛋白與被取代的 DNA 鏈結合，并使形成的 D 環(huán)保持穩(wěn)定。然后從引物啟動由聚合酶介導的 DNA 擴增，但前提是存在靶標序列。一旦啟動，擴增反應將快速進行，因此開始時只需一點靶標DNA 拷貝數，高特異性 DNA 擴增在數分鐘內即可達到可檢出水平。
為什么選擇RPA方法?
速度
RPA 非?？焖?，在 37-42°C 這一通常最適宜的反應溫度下，只需少量核酸分子即可在 3-10 分鐘(通常)內擴增至可檢出水平，但這將取決于靶標大小。在大部分情況下，只需要一個人即可在半小時內采集樣本、制備樣本、運行檢測并取得結果，并且無需專業(yè)培訓。
靈敏度
RPA 可檢測復合樣本中的單拷貝 DNA 和10拷貝甚至更少 RNA，而無需預先純化核酸。
特異性
RPA 具有高度特異性，該技術可從可能含有數百納克來自多個不同物種的不相關復合基因組 DNA(包括人 DNA)的樣本中識別并擴增單個 DNA 分子，抗干擾能力強。
恒溫運行
RPA 在恒定的低溫(37-42°C 最適宜)下運行。對于某些應用，如果需要，即便體溫也可支持 RPA 擴增。該反應在偏離溫度及低溫設置下也表現穩(wěn)健，即使在常規(guī)室溫 25°C 下也將奏效，雖然反應速度會下降;在此溫度下，只要此生物化學過程被正確配置，仍可在一小時內獲得結果。
樣本容差
RPA 對樣本類型的要求寬松，有時可直接檢測未經核酸純化的原始樣本，例如血液、鼻拭子或培養(yǎng)基。通常，只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可，例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的最合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素，并將需要設計到檢測程序中。RPA 對某些復合樣本類型的寬容性使該技術在原則上非常適合廣泛的現場和床邊應用。
廣泛的適用性
RPA 能夠方便地應用于任何 DNA 或 RNA 靶標，無序列偏好性，這一點對于NGS尤其重要。如果將逆轉錄酶添加到反應混合液中開發(fā)出了超高靈敏度的 RNA 一步檢測法。
多重檢測
通過將多種引物同時添加到同一反應管中，單次 RPA 測試即可擴增和檢測多種不同的靶標。
低設備成本
RPA 僅需要基本的檢測設備，也就是說，最終用戶可以使用我們的產品開發(fā)出適合各種應用和環(huán)境的人性化診斷方法和試劑盒。
靈活的試劑形態(tài)
核心反應組分能夠以穩(wěn)定的干燥形態(tài)供貨，該形態(tài)易于運輸，且無需冷藏即可儲存最多 12 個月(穩(wěn)定性可能因用途不同而有變化，因此仍建議在冷藏條件下長期儲存)，也能夠以 PCR 試劑更常見的液體形態(tài)供貨，該形態(tài)允許用戶針對特定的應用改變反應體積和組分比例。
多種檢測形式
RPA 可應用于各種檢測系統(tǒng)和儀器，包括實時熒光探針和夾心法等形式。
RPA 與 其他核酸擴增方法PCR及LAMP的比較
T16-ISO Instrument
T16-ISO 是一款在適宜的恒定溫度下可進行下一代診斷性 DNA/RNA 擴增的高級恒溫儀器，這一緊湊、低成本、獨立、靈敏的儀器適合實地和床邊診斷應用。
Product: T16Device
Features
最多容納 2 排（每排 8 支）標準 0.2 mL PCR 試管
每個試管三通道熒光檢測*
對 RPA 反應進行磁力混合（需要在 RPA 反應混合物中加入微珠）
儀器可配置為獨立運作或連接 PC 模式
便于使用高級桌面軟件進行研究應用
觸摸屏 LCD，圖形用戶界面可實現高級工作流程管理
可互換的模塊化光度頭，可配置為多通道
試驗溫度范圍為 37?C 到 65?C
體積小巧，適合臺式和實地應用
USB 和以太網連接可提供數據數據傳輸和 LIS 集成
靈活的試驗曲線創(chuàng)建和高級數據顯示與導出
隨附攜帶箱和軟件
T8-ISO Instrument
高級
T8-ISO 儀器是一款緊湊、獨立、高靈敏度的下一代分子檢驗儀器，適合實驗室和實地應用。T8-ISO 儀器是一款可測量兩種熒光團的便攜式儀器：FAM? 和
ROX? 或其他具有相似光譜的熒光團。
本儀器僅適合作研發(fā)之用，未針對特定檢測方法和應用進行進一步測試和認證，不適合作體外醫(yī)療診斷
(IVD) 之用。
Features
體積小巧，適合臺式和實地應用
可容納 8 個標準的 0.2 ml 試管
支持重組酶聚合酶擴增 (RPA)
對 RPA 反應進行磁力混合（需要在 RPA 反應混合物中加入微珠）
每個試管雙通道熒光檢測
便于使用高級桌面軟件進行檢測配置管理和導出
大尺寸 4.3 英寸觸摸屏 LCD，可供查看單個圖形
圖形用戶界面可實現高級工作流程管理
試驗溫度范圍為 37?C 到 65?C
USB 和以太網連接可提供數據數據傳輸和 LIS 集成選項
提供選配的外置電池 - 訂單
提供選配的攜帶箱 - 訂單
PCRD Nucleic Acid Detection（50 件/包）
被稱為
PCRD 的核酸側向層析免疫檢測 (NALFIA) 可用于取代 DNA 瓊脂糖膠電泳。PCRD 只需 10 分鐘即可檢出成功擴增的靶標 DNA
序列，是希望快速獲取結果的繁忙實驗室的理想之選。
PCRD
是替代瓊脂糖膠電泳的快速、安全且經濟實惠的檢測方法，可與重組酶聚合酶擴增 (RPA) 結合使用。
Product code: PCRD3Kit
Features
兩條檢測線（外加質控線）可實現多個分析物的檢測
與 TwistAmp? nfo 試劑盒完全兼容
絕佳的信噪比
容易使用
在 10 分鐘內給出結果
無需擴增后純化或雜交
U-Star Disposable Nucleic Acid Detection Device
一次性核酸檢測設備隨附抗體夾心法免疫層析試紙條。檢測在密封盒內進行，以防擴增產物交叉污染。只需 1-2 分鐘的準備，將試管放入盒內之后 10-15 分鐘內出結果。相比傳統(tǒng)的電泳，本產品是一種快速、防交叉污染、無毒性且免儀器的核酸擴增產物檢視方法。
Features
每包 20 套
非常容易使用
無需使用儀器
在盒內密封反應管后 15 分鐘內出結果
包含擴增子容器，非常適合實地使用
可根據要求單套銷售。
Milenia Genline HybriDetect 1 (100 件/包)
Milenia
Genline HybriDetect 1 橫向流動試紙條可用于檢測在 TwistAmp??nfo 試劑盒與 TwistAmp? nfo
探針及帶標記擴增引物結合使用下生成的擴增產物。Milenia Genline HybriDetect 1
橫向流動試紙條可以檢測帶生物素標記的擴增子。擴增后，可將產物稀釋、涂點到試紙條樣本墊并在緩沖液中運行數分鐘，隨后如果檢測線上有金離子聚集則表明存在特異性擴增子。雖然最初是為
PCR 應用而開發(fā)，本產品在與 RPA
系統(tǒng)結合使用時無需擴增后純化或雜交即可得出極佳的結果。橫向流動試紙條能夠以便利的免儀器方式進行檢測，在某些環(huán)境中可能是一個不錯的選擇。
Product code: MILENIA01
Features
每盒包含 100 個專門為 RPA 客戶生產的試紙條
無需擴增后純化或雜交
無需使用儀器
一條檢測線（外加質控線）可實現單個分析物的檢測
與 TwistAmp? nfo 試劑盒完全兼容
默瑞(上海)生物科技有限公司是Chromotek品牌的中國總代理。默瑞擁有兩個產品部，儀器部和試劑部。
儀器部主要產品有：Leica顯微系統(tǒng)，Merk Millipore實驗室純水超純水儀及配套耗材，Tecan酶標儀、液體工作站，Roche實時定量PCR儀、DNA測序儀、核酸純化，Partec流式細胞儀，IKA桌面小儀器，Miele清洗機，UniEquip凍干機和層析冷柜等。
試劑部主要產品有： TwistDx恒溫擴增試劑盒，Echelon酯類研究試劑，Jackson ImmunoResearch抗體，MTI-GlobalStem細胞轉染試劑，ChromoTek標簽抗體， Horizon Discovery測序標準品和細胞，Enzymatics二代測序酶， BiosPacific抗體抗原，bioWORLD植物生長劑，Nanocs PEG修飾劑，Spectrumlabs透析袋，Brighter Ideas熒光蛋白，Lumiprobe熒光染料，Polysciences微球，Emfret心血管疾病研究抗體， Iduron糖胺聚糖產品，JenaBioscience分子試劑，eENZYME病毒研究工具等。
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