相關(guān)背景：
隱孢子蟲(Cryptosporidium Tyzzer,1907)為體積微小的球蟲類寄生蟲。廣泛存在多種脊椎動物體內(nèi)，寄生于人和大多數(shù)哺乳動物的主要為微小隱孢子蟲(C.parvum)，由微小隱孢子蟲引起的疾病稱隱孢子蟲病(cryptosporidiosis)，是一種以腹瀉為主要臨床表現(xiàn)的人畜共患性原蟲病，被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為世界六大腹瀉病之一。自1976年在美國首次發(fā)現(xiàn)人體感染隱孢子蟲病例以來，目前該病已遍及除南極洲外的90多個國家，300多個地區(qū)。發(fā)達(dá)國家隱孢子蟲陽性率為0.6%～20%，發(fā)展中國家為4%～32%，我國于1987年在南京首次報(bào)道2例人體感染病例，此后陸續(xù)在江蘇、安徽、山東、湖南、云南、黑龍江、河南、上海等省(直轄市、自治區(qū))均有隱孢子蟲感染的報(bào)道，感染率為1.33%～13.49%。
文章概述：
作為隱孢子蟲病檢測金標(biāo)準(zhǔn)的分子診斷技術(shù)PCR,只適合于實(shí)驗(yàn)室檢測，需要昂貴的溫度循環(huán)儀，而且商業(yè)化核酸提取試劑盒步驟多，操作繁瑣，并不適用于現(xiàn)場快速檢測工作的進(jìn)行。基于此，建立一種操作簡單，快速，高效的檢測方法對于隱孢子蟲屬檢測工作意義重大。有研究發(fā)現(xiàn)，通過加入0.1%十二烷基肌氨酸鈉的沸水可以使隱孢子蟲卵囊中DNA釋放出來，稱為LLS法。因此本文作者利用熱水法(LLS)分離奶牛糞便中DNA，并且通過膠體金試紙條結(jié)合RPA技術(shù)(LF-RPA)快速檢測臨床樣本中的隱孢子蟲。
1 通過不同時間和孵育溫度下LF-RPA擴(kuò)增反應(yīng)顯示： LF-RPA擴(kuò)增體系在不同溫度(30-45℃)下，10min之內(nèi)便能達(dá)到顯著的檢測效果。
2 通過多種寄生性原生蟲屬和陰性對照樣本測試LF-RPA反應(yīng)顯示：LF-RPA反應(yīng)引物和探針系統(tǒng)表現(xiàn)出高度特異性。
3 通過臨床樣本靈敏度試驗(yàn)顯示，LF-RPA檢測靈敏度能達(dá)到0.5 oocysts/reaction，遠(yuǎn)高于巢式PCR的10 oocysts/reaction，并且不受PCR抑制劑的影響。
值得注意的是，由于RPA反應(yīng)的高靈敏性，容易發(fā)生交叉污染，所以實(shí)驗(yàn)操作過程中使用的手套，管子，槍頭必須保證無菌，操作區(qū)在使用前必須進(jìn)行紫外處理;另外長時間(30min)將LF試紙條檢測留在PBST緩沖液中會產(chǎn)生假陽性，但通過將擴(kuò)增子1:100稀釋(而不是1:50稀釋)將有效的解決這個問題。總而言之，本文建立一種高靈敏性和高特異性的，低成本的，快速檢測糞便中隱孢子蟲屬的新方法，為預(yù)防和控制隱孢子蟲病，開發(fā)臨床診斷試劑盒提供一種新的思路。
相關(guān)產(chǎn)品：
TwistAmp nfo kit：
Milenia HybriDetect 1
